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丹磺酰氯可用于測(cè)定肽鏈的氨基末端
更新時(shí)間:2022-06-09   點(diǎn)擊次數(shù):6212次

丹磺酰氯可用于測(cè)定肽鏈的氨基末端


丹磺酰氯是一種強(qiáng)熒光劑,可用于測(cè)定肽鏈的氨基末端,能專(zhuān)一地與肽鏈N端α-氨基反應(yīng)生成丹磺酰-肽,后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強(qiáng)的熒光,可直接用電泳法或?qū)游龇ㄨb定出N-端是何種氨基酸。丹磺酰氯是用于標(biāo)記蛋白質(zhì)和氨基酸的熒光試劑。


T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)-9.6.jpg

產(chǎn)品參數(shù)

別名: 丹酰氯,二甲氨基萘磺酰氯,Dansyl Chloride ,DNSCl,5-(Dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride, 

性狀:   橙黃色粉末

CAS號(hào): 605-65-2

分子式: C12H12CINO2S

分子量: 269.74

純度:   >98%

溶解性: 溶于丙酮

保存:2-8℃干燥。


丹磺酰氯高效液相色譜儀測(cè)氨基酸實(shí)驗(yàn) 

原理:蛋白質(zhì)樣品經(jīng)酸或堿水解后再行用丹磺酰氯進(jìn)行衍生蛋白質(zhì)樣品經(jīng)酸或堿水解后再行用丹磺酰氯進(jìn)行衍生化作用溶解于流動(dòng)相溶液,用具有C8反相柱熒光檢化作用溶解于流動(dòng)相溶液,用具有C8反相柱熒光檢測(cè)器的反相液相色譜進(jìn)行測(cè)定,能很好地測(cè)定出各種測(cè)器的反相液相色譜進(jìn)行測(cè)定,能很好地測(cè)定出各種氨基酸的含量。 

實(shí)驗(yàn)步驟 

1、樣品處理與測(cè)定 

(1)蛋白質(zhì)的水解:稱(chēng)取1毫克的蛋白質(zhì)樣品或相當(dāng)于1毫克蛋白質(zhì)的樣品于玻璃管中,加入1毫升 6mol/L鹽酸后用磨口封口或燒結(jié)封口,移入110℃恒溫箱中加熱16小時(shí),取出冷卻。用微量注射器取20微升水解樣液于小玻璃管中,加入10微升正亮氨-酸作為內(nèi)標(biāo)溶液,并在水浴中蒸發(fā)干燥。 

(2)衍生物制備及其測(cè)定:將上述干燥制備的樣品加入40微升 pH=10.5 緩沖溶液,接著加入100 微升丹磺酰氯工作試劑,緊密封住管口,充分振搖15分鐘,將樣品管在100℃ 水浴中加熱2分鐘,取出冷卻。吸取1毫升以1:1的比例相混合的甲、乙兩種流動(dòng)相的混合溶液于樣品管中,充分振搖15秒,吸取10微升左右的此樣品溶液注入液相色譜柱內(nèi),記錄色譜圖。 

2、校正因子fi的確定用微量注射器吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)混合溶液20微升于小玻璃管中,加入10微升正亮氨-酸作為內(nèi)標(biāo)溶液,并在水浴中蒸發(fā)干燥,然后按樣品處理中的方法制備標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的衍生物,再加入1毫升流動(dòng)相混合溶液,用微量注射器吸取5-10微升經(jīng)衍生化的氨基酸溶液進(jìn)入色譜儀,記錄色譜圖,并確定各氨基酸的出峰保留時(shí)間和峰面積,以及測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物和各氨基酸的峰面積,并求出各氨基酸校正因子fi。

丹磺?;ǚ治龅鞍踪|(zhì) N-末端氨基酸實(shí)驗(yàn) 

原理:蛋白質(zhì)的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質(zhì)) 反應(yīng), 生成DNS-蛋白質(zhì), 經(jīng)水解可生成DNS-氨基酸。通過(guò)聚酰胺薄膜層析分析DNS-氨基酸, 可確定蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸。此法靈敏度高, 也可用于蛋白質(zhì)的氨基酸組成的測(cè)定。聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是: 它能和被吸附物質(zhì)間形成氫鍵, 這種氫鍵的強(qiáng)弱決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵。因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x物在聚酰胺表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的連續(xù)過(guò)程, 就能導(dǎo)致分離物達(dá)到分離的目的。


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