ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。
近期，赤峰寶山中醫(yī)院朱艷萍等研究了ELISA檢測(cè)mei毒抗體導(dǎo)致老年人產(chǎn)生假陽(yáng)性的分析，研究發(fā)現(xiàn)，年齡與疾病因素是造成TP-ELISA法檢測(cè)老年人梅毒特異性抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性的重要因素。該文章發(fā)表于2016年04期《中國(guó)醫(yī)藥指南》上。
該研究旨在討論使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)檢測(cè)梅毒抗體致老年人產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果的原因。
研究者們采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別檢測(cè)450例老年人及1912例中青年患者血清中的梅毒特異性抗體,陽(yáng)性者再使用已被CDC定為確診方法的梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)診斷試劑進(jìn)行復(fù)檢確診。
結(jié)果顯示，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)法檢測(cè)出的老年組的假陽(yáng)性率明顯高于中青年組,兩組間具有顯著性差異(P<0.05)。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。
8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可保存。
12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。
16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
18、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
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